RESUMO
The main goal of this study is to alert researchers who work with cell cultures for the risk of contamination by structures called nanobacteria (NB). NB are tiny structures with size varying from 80 to 500 nm, commonly occurring in clusters and producing a biofilm which contains carbonate or hydroxyl apatite. The most likely source of cell culture contamination by such organisms is serum used as supplement in culture media. The presence of NB leads to a progressive culture deterioration with accumulation of granules (probably phagocytized NB) in cytoplasmic vacuoles, an increasing number of dead cells in the supernatant and degeneration of cells that remained attached to the bottom of the vessel. NB can also be found in culture supernatants where they are found in clusters with variable size and displaying brownian movement. In this study, 19 cell lineages, 8 batches of sera and 1 batch of growth supplement from different sources were analyzed. Samples from sera were cultured in Eagle's Minimum Essential Medium (E-MEM) or incubated directly at 37°C. Tests carried out to detect the presence of extracellular bacteria, Mycoplasma sp and viruses were all negative. Analysis by scanning electron microscopy (SEM) revealed tiny oval structures less than 500 nm in size, isolated or in small groups, in all material analyzed except in one fetal bovine serum batch.
O principal objetivo deste estudo é alertar aos pesquisadores que trabalham com cultivos celulares sobre o risco de contaminação por estruturas denominadas nanobactérias (NB). NB são estruturas muito pequenas cujo tamanho varia de 80 a 500 nm e que comumente ocorrem em agrupamentos, produzindo biofilme de carbonato ou hidroxiapatita. A fonte mais provável de contaminação dos cultivos celulares por tais organismos é o soro utilizado como suplemento nos meios de cultura. A presença de NB leva a uma progressiva deterioração do cultivo com acúmulo de grânulos (provavelmente NB fagocitadas) em vacúolos citoplasmáticos, um número cada vez maior de células mortas no sobrenadante e degeneração das células que permaneceram aderidas à superfície do frasco de cultura. NB podem ser encontradas também em sobrenadantes de cultivos onde são observadas em agrupamentos de tamanho variável com movimento browniano. Neste estudo, 19 linhagens celulares, 8 lotes de soro e 1 lote de suplemento de diferentes procedências foram analisados. Amostras de soros foram cultivadas em Meio Essencial Mínimo de Eagle (E-MEM) ou incubados diretamente a 37°C. Testes efetuados para detectar a presença de bactérias extracelulares, Mycoplasma sp e vírus foram todos negativos. Análise por microscopia eletrônica de varredura (SEM) revelou minúsculas estruturas ovóides com tamanho inferior a 500 nm, isoladas ou em pequenos agrupamentos, em todos os materiais analisados exceto em um lote de soro fetal bovino.
Assuntos
Bovinos , Técnicas de Cultura de Células , Poluição Ambiental , Técnicas In Vitro , Métodos , Amostragem , SorologiaRESUMO
OBJETIVOS: Verificar a aderência bacteriana a lentes intra-oculares de silicone e de polimetilmetacrilato como possível fator de risco no desenvolvimento de endoftalmite pós-operatória, utilizando-se um modelo in vitro com três microrganismos potencialmente patogênicos. MÉTODOS: As análises foram realizadas com cepas de Staphylococcus aureus ATCC 29213, Staphylococcus epidermidis (amostra clínica) e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 incluindo a determinação de curvas de crescimento, testes para verificação de produção de cápsula, avaliação da hidrofobicidade, testes de aderência a diferentes materiais, microscopia óptica, microscopia eletrônica de varredura e microscopia de força atômica. RESULTADOS: A produção de cápsula e a aderência das três diferentes cepas não mostraram qualquer relação com a quantidade de microrganismos; em relação às lentes intra-oculares de polimetilmetacrilato e de silicone, não houve diferença estatisticamente significativa na aderência de S. aureus e S. epidermidis; P. aeruginosa foi o microrganismo mais aderente a ambos os materiais. A microscopia eletrônica de varredura confirmou estes achados em relação à aderência, ao peso que a microscopia de força atômica evidenciou a produção de biofilme pelas cepas de S. aureus, S. epidermidis e P. aeruginosa. CONCLUSÕES: Constatou-se, in vitro, que os materiais analisados não diferiram com relação à taxa de aderência bacteriana, porém, P. aeruginosa apresentou maior eficiência de adesão entre as bactérias testadas. Todas as cepas produziram biofilme. Silicone foi o material mais hidrofóbico, quando comparado ao polimetilmetacrilato.
